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AAV在眼部注射方法有哪些

肺部注射包括鼻内滴注法和气管插管术。鼻内滴注法操作简单，直接将病毒悬液滴入鼻腔，但颗粒可能沉积在上呼吸道，需要较大剂量的病毒。气管插管术能将病毒载体直接输入肺部，避免上呼吸道损失，但需特殊设备和技巧。此外，还有气管内注射，操作与鼻内滴注法类似，但直接注入气管。

然而，基于AAV载体的基因治疗通常采用视网膜下腔注射，要求高技能操作，增加视网膜脱离风险，并受限于横向扩散能力，只能感染注射中心附近一小部分视网膜细胞。玻璃体腔注射避免了这些问题，是一种常用的安全、简便的递送方式。但缺乏高效且特异性转导视网膜细胞的AAV载体。

麻醉小鼠，确保其对疼痛刺激无反应。2） 保护小鼠眼睛，保持湿润并抑制眨眼反射。3） 保持小鼠体温，防止麻醉后过低。4） 清洁小鼠耳朵，并消毒。5） 打开鼓室大疱，暴露镫骨动脉和圆窗膜。6） 轻轻在圆窗膜中心穿刺，观察液体流出。7） 将0.6~2μL的AAV载体注射至耳蜗鼓阶。

然而，基于AAV载体的眼病基因治疗通常需要视网膜下腔注射，这需要经验丰富的专家进行，增加视网膜脱离的风险。AAV横向扩散能力有限，只能感染注射中心附近的一部分视网膜细胞。玻璃体腔注射能避免这些问题，是一种常用、安全、操作简单的递送方式。

圆窗膜（RWM）注射方法，适用于新生小鼠和非人灵长类动物，载体可传送至耳蜗鼓阶的外淋巴。此方法对内耳外毛细胞转导率相对有限。具体操作包括麻醉小鼠，消毒耳朵，切开皮肤露出鼓室大疱，然后在大疱上穿孔，使用移液管在RWM中心轻轻穿刺，注入0.6~2μL的AAV载体，封孔并缝合伤口。

实现特异性表达的方法包括选择组织特异性血清型、使用细胞特异性启动子以及局部注射等。通过优化AAV血清型、启动子选择与注射策略，可实现目标组织或细胞的精准基因传递与表达，为基因治疗与科研提供强大工具。针对特异性表达的策略不断优化，AAV的应用领域与潜力持续扩展。