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β半乳糖苷酶测定

1、β半乳糖苷酶试验（ONPG试验）。有的细菌可产生β半乳糖苷酶，可分解邻-硝基苯-β-D-毗喃半乳糖苷（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranos，ONPG）。ONPG为无色，经β半乳糖苷酶水解后，可生成黄色的邻位-硝基酚（O-nitrophenol）。

2、当完成所有时间点测定后，在420 nm处测光密度，记录吸光值，并且计算吸光值与时 间的斜率。斜率和β-半乳糖苷酶的活性成正比。注意：若在420nm处吸光值高于0，则不能采信。 在计算其实际活性时，先制作o-硝基酚标准曲线图，然后根据样品的吸光值在曲线上找 出对应的浓度。

3、【答案】：A ONPG试验为β-半乳糖苷酶试验，有的细菌可产生β-半乳糖苷酶，能分解邻硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）而生成黄色的邻硝基苯酚。本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。

4、一般测定酶活性就是直接测定底物或产物的变化。如果乳糖是该酶的底物则应该没有问题。当然需要有灵敏的检测方法。

5、GAL是细胞溶酶体中的水解酶，在肾近曲小管上皮细胞中含量较高。尿中GAL活性可反映肾实质，特别是肾小管的早期损伤，与尿中N-乙酰--D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）一同测定作尿酶谱分析，有助于病程观察和预后评价。